ABSTRACT
Se moduló la actividad patogénica de Escherichia coli TL+ (termolábil) y la subunidad A de la toxina de V. cholerae (ADPribosil-transferasa) utilizando fracciones proteicas aisladas de G. intestinalis, así como un péptido sintético, obtenido de la secuencia de la proteína ARF (Factor de ribosilación) de Giardia intestinalis, esta reacción enzimática "in vitro" fue demostrada "in vivo". Material y Métodos: De 1X109 trofozoitos de Giardia intestinalis cepa Portland I se obtuvieron por isoelectroenfoque fracciones proteicas con pH entre 6.5 y 9.5; Se utilizaron diferentes concentraciones de la fracción pH 6.8 para llevar a cabo mezclas de reacción enzimática (ADP ribosiltransferasa) incubándolas con E. coli TL+ cepa H10407. En la reacción "in vivo" se empleo el intestino delgado de conejos machos albinos de la raza Nueva Zelanda formando asas ligadas, en las que se inocularon las mezclas de reacción enzimática antes mencionadas, así como las obtenidas con un heptapéptido sintético (182-190) de la secuencia de la proteína ARF de Giardia con la subunidad A de la toxina de Vibrio cholerae. La actividad de la toxina fue evaluada por la secreción de líquido luminal en las asas y la concentración de AMP cíclico en el tejido. Resultados: Al utilizar diferentes concentraciones de la fracción pH 6.8 se moduló la actividad de ADP ribosiltransferasa de la toxina TL+ de E. coli, considerando la disminución en el volumen de líquido luminal y AMPc en el tejido de las asas. Se observó el mismo resultado con el péptido sintético y la subunidad A de la toxina de V. cholerae. Conclusiones Se hizo evidente la presencia de una proteína ARF (Factor de ADP ribosilación) en la fracción proteica pH 6.8 aislada de G. Intestinalis, así como en el péptido sintético obtenido de la secuencia de la proteína ARF. La especificidad demostrada por la reacción "in vivo" infiere la posibilidad de modular del efecto patogénico de estas toxinas sobre epitelio intestinal abriendo la posibilidad de utilizarse en forma terapéutica.
Subject(s)
Adenylyl Cyclases , ADP-Ribosylation Factor 1 , Bacterial Toxins , Escherichia coli , In Vitro Techniques , Cell Separation , Giardia lambliaABSTRACT
A ratas machos Long Evans, de 21 días de edad y peso promedio de 40 g se les administraron -mediante sonda gástrica- quistes de Giardia lamblia procedentes de diez pacientes pediátricos con sintomatología digestiva. Un grupo testigo no se inoculó. Después de 15 días (postinoculación) los animales presentaron disminución de peso; al relacionarlo con el periodo postinoculación, los valores de la pendiente fueron de m= 2.83 a 7.48 con un coeficiente de correlación de Persona entre 0.79 a 0.99. En 60 por ciento de los animales las alteraciones de la mucosa intestinal fueron del grado III de Rubi, con actividad enzimática de lactasa entre 2.235 ñ 0.875 y 3.533 ñ 1.107 U/g de proteína. El resto de los animales presentaron alteraciones del grado I y II de Rubi con actividad de lactasa más alta, aunque no llegaron a los valores del grupo control; la respuesta inmune humoral tambén se vio dividida en la misam proporción. De este estudio podemos concluir que encontramos diferencias antigénicas y de patogenicidad entre los aislados de Giardia lamblia, provenientes de pacientes sintomáticos, lo que nos podría explicar el diferente comportamiento del parásito frente al huésped e inclusive la falta de sintomatología que en ocasiones presenta